蘇州千舍生物教你六招使用ELISA試劑盒

一、實驗原理

    用于免疫酶技術的酶有很多，如過氧化物酶，堿性磷酸酯酶，β－Ｄ－半乳糖苷酶，葡萄糖氧化酶，碳酸酐酶，乙酰膽堿酯酶，6－磷酸葡萄糖脫氧酶等。常用于ELISA法的酶有辣根過氧化物酶，堿性磷酸酯酶等，其中尤以辣根過氧化物酶為多。由于酶摧化的是氧化還原反應，在呈色后須立刻測定，否則空氣中的氧化作用使顏色加深，無法準確地定量。 
     辣根過氧化物酶（HRP）是一種糖蛋白，每個分子含有一個氯化血紅素（protonhemin）區作輔基。酶的濃度和純度常以輔基的含量表示。氯化血紅素輔基的大吸收峰是403nm，HRP酶蛋白的吸收峰是275nm，所以酶的濃度和純度計算式是（已知HRP的A（1cm 403nm 1%）＝25，式中1％指HRP百分濃度為100ml含酶蛋白1g，即10mg/ml，所以，酶濃度以 mg/ml 計算是HRP的A（1cm 403nm mg/ml=2.5）HRP純度（RZ）=A403nm/A275nm純度RZ（Ｒeinheit Zahl）值越大說明酶內所含雜質越少。高純度HRP的RZ值在3.0左右，高可達3.4。用于ELISA檢測的HRP的RZ值要求在3.0以上。 

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  說到ELISA試劑盒，相信科研朋友們都不會陌生。ELISA試劑盒的誕生，是為了幫助科研工作者省掉繁瑣的實驗過程，提高科研效率。如果選對了試劑盒，用對了實驗技巧，就會讓您的實驗效率事半功倍。將為您解析ELISA試劑盒六大使用技巧，請收下！

1、查找待測樣本的蛋白濃度：可以通過NCBI的文獻，uniprot，pax-dab上給出的蛋白表達量參考值來比較ELISA試劑盒中給出的樣本值與報道值是否一致；

2、試劑盒的應用種屬、檢測樣本的種類：除試劑盒特別說明外，一般不同種屬不能通用。常見待測樣本種類有：血清和血漿（不同抗凝劑），細胞上清，和細胞裂解液，試劑盒中不同樣本的稀釋液不混用；

3、試劑盒的檢測范圍：也就是標曲范圍，特別要注意待測樣本濃度是否落在標曲范圍內，對于濃度很高的樣本，可以先進行預實驗摸索到比較好的稀釋倍數后再大量測定樣本。

Hyclone胎牛血清SH30084.03  、Hyclone胎牛血清SH30406.02  、Hyclone胎牛血清SH30406.05 、Hyclone胎牛血清SH30396.03  、Hyclone胎牛血清SH30070.03、Hyclone胎牛血清 SH30370.03  、活性炭/葡聚糖胎牛血清 SH30068.03 、馬血清SH30074.03 、烏拉圭胎牛血清 SV30087. 03 、Hyclone胎牛血清SH30071.03 、Hyclone胎牛血清SV30160.03。

BOVOGEN胎牛血清 SFBS 、BOVOGEN新生牛血清 SNCS。

BI優等胎牛血清 04-001-1ACS 、BI ES級別胎牛血清 04-002-1A 、

BI 間充質胎牛血清 04-400-1A 。

PAN胎牛血清FBS P30-3302  、PAN胎牛血清FBS ST30-3302 、PAN ES級別胎牛血清 ST30-2602 、PAN胎牛血清Plus ST30-3302P 。

NTC優等胎牛血清 SFBE。

Gemini優等胎牛血清 900-108 、Gemini特級胎牛血清 100-500  、Gemini科研用人AB血清100-512 。

SBI 無外泌體血清 EXO-FBS-50A-1、雙抗15140-122、SV30010  、胰酶 25200-056、SH30042.01 、GIBCO 胰酶 25200-072。

4、試劑盒中的稀釋線性及回收率：

A、稀釋線性一般指樣本稀釋線性，是將樣本梯度稀釋下來，看各稀釋梯度濃度是否成線性，參考樣本稀釋線性可以選擇樣本的稀釋倍數；

B、稀釋線性也有做加標稀釋線性的情況，加標稀釋線性是將標準品加入樣本中測定加入的標準品濃度測定是否準確，同樣也是確定待測樣本稀釋倍數的參考指標。一般線性和回收率的范圍在80%-120%比較合適；

5、試劑盒的其它指標：

A、靈敏度：試劑盒能夠檢測到的樣本zui低濃度的能力，如果待檢指標含量很低，需要選擇高靈敏度的ELISA試劑盒；

B、板間和板內的變異系數（CV%）:反映板內和不同板之間是否均勻，CV%一般小于10% 比較好。

6、試劑盒的有效期：試劑盒的有效期一般是半年至一年，樣本準備時間需要考慮到試劑盒的有效期。

    我公司ELISA試劑盒，均經過充分測試，以保證*的品質和可重復性。這種即用型的ELISA試劑盒，含有ELISA實驗所需的全部試劑和耗材，并通過精心挑選抗體對，及優化配方稀釋液，確保結果具有無以倫比的準確性。如果您對我公司的胎牛血清、人血清、人AB血清、無外泌體血清SBI、新生牛血清等產品感興趣，歡迎咨詢訂購！