細(xì)胞培養(yǎng)問題----沉淀

當(dāng)排除了污染后，細(xì)胞培養(yǎng)基的渾濁通常可以解釋為金屬、蛋白質(zhì)和其他培養(yǎng)基成分的沉淀。沉淀物可能對(duì)細(xì)胞健康有害，因?yàn)樗麄兛赡芡ㄟ^整合作用等過程去除營養(yǎng)物質(zhì)和其他需要的成分，從而改變培養(yǎng)基成分。

沉淀的原因

溫度變化

溫度是細(xì)胞培養(yǎng)中沉淀的主要原因之一。當(dāng)暴露于端溫度變化時(shí)，高分子量的血漿蛋白會(huì)從溶液中沉降。熱失活和凍融循環(huán)會(huì)促進(jìn)蛋白質(zhì)的變性和沉淀。由于液體或復(fù)溶培養(yǎng)基在每次使用之間保持冷藏狀態(tài)，鹽可能會(huì)沉淀出來，特別是10倍或其他濃縮液中析出。

失水引起的濃度變化

如果培養(yǎng)基存在蒸發(fā)，培養(yǎng)基組分（包括鹽）的濃度將增加。在培養(yǎng)基的表面特別容易形成晶體沉淀。

鈣鹽

在制備無血清培養(yǎng)基時(shí)，組分的添加順序可能會(huì)導(dǎo)致不溶性分子的形成。鈣鹽特別容易沉淀。例如，CaCl₂和MgSO₄在溶液中反應(yīng)形成CaSO₄晶體。高壓滅菌和pH值不穩(wěn)定可能會(huì)加劇這一問題。

金屬元素補(bǔ)充劑

銅、鐵和鋅金屬元素是細(xì)胞生長(zhǎng)所必需的，是無血清培養(yǎng)基的重要補(bǔ)充劑。其他血清成分的缺失可能會(huì)導(dǎo)致這些金屬在培養(yǎng)基中沉淀，產(chǎn)生一個(gè)對(duì)細(xì)胞有毒的環(huán)境。銅和鋅在氧化條件下更加容易沉淀。

污染

培養(yǎng)基渾濁可能是細(xì)菌或真菌污染造成的。

細(xì)胞培養(yǎng)中對(duì)沉淀的故障排除

溫度

有關(guān)培養(yǎng)基的最佳儲(chǔ)存和處理，應(yīng)參閱制造商指南。避免重復(fù)的凍融循環(huán)。

鈣鹽

在逐個(gè)加入其他培養(yǎng)基組分之前，先將CaCl₂單獨(dú)溶解在去離子水中。

濕度

確保燒瓶和培養(yǎng)皿不存在蒸發(fā)。監(jiān)測(cè)培養(yǎng)箱的濕度，密封培養(yǎng)器皿，防止干燥。

其他金屬

加入鐵結(jié)合蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白可防止鐵在培養(yǎng)基中沉淀。

污染

丟棄被污染的細(xì)胞并對(duì)培養(yǎng)箱體進(jìn)行消毒。遵循良好的實(shí)驗(yàn)室措施以避免污染。

有目的的沉淀

盡管通常在細(xì)胞培養(yǎng)中不希望有沉淀，但是沉淀可以用作上清液中蛋白質(zhì)的純化策略。例如，硫酸銨沉淀法有時(shí)被稱為“鹽析"技術(shù)，用于從雜交瘤上清液或血清中純化抗體。