產品名稱：雞胚成纖維細胞永生化（種屬鑒定）

規格： 5*10 5   

細胞詳述

近年來，有關干細胞的研究是生物技術領域的熱點之一。胚胎成纖維細胞具有相對容易獲得，增殖能力強等特點，因此胚胎成纖維細胞常作為哺乳動物干細胞培養的飼養層細胞，主要分泌謀學細胞因子，如成纖維細胞生長因子，白血病抑制因子等，以促進干細胞增殖及抑制分化。

該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶SV40基因。

注意事項：  收到細胞后第一次傳代建議1：2傳代，充液培養基是維持培養基，不能用來培養細胞。

細胞特性

1) 細胞來源于實驗動物正常胚胎組織。

2) 細胞鑒定：波形蛋白（Vimentin）免疫熒光染色為陽性。

3) 經鑒定細胞純度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

5) 細胞生長方式：長梭狀細胞，貼壁培養。

產品的運輸和保存

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。

1) 1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。

2) T-25培養瓶充滿wan全培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。

產品使用

1) 本產品僅能用于科研

2) 本產品未通過直接用于活體動物和人的審核

3) 本產品未通過用于活體診斷的審核

雞胚成纖維細胞永生化相關細胞列表

01 什么是細胞永生化？

   正常組織來源的細胞在體外培養條件下可分裂生長，但經過有限次數的傳代后，就會停止增殖，發生衰老和死亡，這種現象稱之為海夫利克極限。有的細胞自發或受外界因素的影響，可以從增殖衰老危機中逃離，從而擁有無限增殖的能力，該過程稱之為細胞永生化（cell immortalization）。

   細胞永生化是癌變的必經途徑。

02 細胞永生化的方法？

   細胞自發永生化的幾率非常小，于人類細胞就更為罕見。

   人為干涉讓細胞永生化的方法包括：放射處理、端粒酶激活、病毒基因轉染、原癌基因激活、抑癌基因抑制等。其中，聽過慢病毒感染使細胞過表達猴腎病毒SV40 T抗原或人端粒酶逆轉錄酶hTERT基因，是常用的兩種細胞永生化的方法。

01端粒酶激活

   端粒酶是一種能延長端粒末端的核糖核蛋白酶，由RNA和蛋白質組成。端粒酶能以自身的RNA為模板，從端粒DNA3’-OH 末端延伸端粒或合成新的端粒DNA， 以補償細胞分裂時染色體末端的縮短，從而維持端粒的長度，使細胞不會因端粒耗盡而出現凋亡。

   正常情況下，大多數體細胞端粒酶的表達是嚴格調控的，表達是瞬時和低水平的。在原代培養的細胞中穩定表達人端粒酶催化亞基(hTERT)基因能穩定端粒的長度，使細胞易于永生化，因此hTERT的激活是細胞永生化的重要步驟。

   雖然激活端粒酶活性能夠使多種人和動物的細胞永生化，但是對于有些細胞，重建端粒酶活性并不足以使細胞永生化，還需要借助癌基因法。

02癌基因法

   一些原癌基因，如Myc, c-Jun, c-Ias, vsrc和Mdm2，通過基因轉染可介導目的細胞永生化。c-Myc是最早被發現的原癌基因，有許多與瘤化相關的功能區域，其轉錄表達的蛋白通過核膜進入細胞核與端粒酶的啟動子結合位點特異性結合，誘導端粒酶mRNA快速表達，直接激活端粒酶活性，促進細胞進入永生化。

   細胞永生化過程中，抑癌基因如p53, pRb, BRCA1, DPC4等，通過等位基因隱性作用、抑癌基因的顯性負作用等逐漸失去活性，細胞老化途徑受阻。實驗證明端粒酶的活性與抑癌基因表達產物的下調有相關關系，推測抑癌基因的失活協同端粒酶的激活共同參與細胞永生化進程。

03病毒基因轉染

很多病毒感染能夠誘導細胞永生化，例如EB病毒(epstein-barr virus, EBV)、猿猴病毒40 (simian virus40, SV40)和人乳頭瘤病毒(human papillomavirus, HPV)。這些病毒感染其天然宿主細胞，能誘導細胞永生化。

   EBV能使B淋巴母細胞永生化形成淋巴母細胞樣細胞系，它是通過潛伏蛋白激活細胞因子與其受體相互作用的途徑使細胞永生的。EBV永生化B細胞的一個顯著的特點是端粒酶活性的提高，這可能是導致B細胞永生的主要原因。目前，EB病毒介導的細胞永生化應用最多的是B淋巴細胞，其他細胞中的應用很少。

   SV40是簡單的真核細胞病毒，SV40的T抗原片段是常用的目的片段，將其整合入靶細胞核內并表達，可導致細胞增殖活力的改變并表現出多種與腫瘤相關的轉化顯型。應用的方法包括：野生型SV40病毒共培養感染靶細胞、磷酸鈣法、電穿孔以及逆轉錄病毒載體法等。

   HPV已成功將人的包皮細胞、角化上皮以及乳腺、胰導管和口腔等的上皮細胞永生化。HPV病毒的早期表達蛋白E6和E7在細胞永生化中起決定性作用。E6和E7蛋白能夠改變細胞的終末分化，誘導細胞進入S期，使細胞繞過正常細胞的周期檢查點。