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2022-415
哪些原因容易導(dǎo)致PAN胎牛血清沉淀：1.溫度改變太大，血清由-20℃直接放入37℃解凍，因溫度改變劇烈容易導(dǎo)致沉淀。2.血清在室溫或4℃冰箱放置時間太久，血清中的不穩(wěn)定成分會被破壞，影響細胞生長效果；導(dǎo)致血清品質(zhì)變差，也會產(chǎn)生沉淀。3.血清分裝凍存時，注意在不產(chǎn)生氣泡的情況下?lián)u晃均勻，避免因血清成分濃度改變產(chǎn)生沉淀。4.血清滅活后容易產(chǎn)生沉淀，如需使用滅活血清，請按56℃，30分鐘，輕微搖晃原則操作，滅活溫度過高、時間過長、搖晃不均都容易產(chǎn)生沉淀。5.如有血清沉淀，分裝后進行...
查看更多2022-414
進口胎牛血清需要熱滅活嗎？何謂熱滅活？一般是以56C，30分鐘來處理已解凍的血清，因為此加熱步驟，可以使補體去活化，而補體所參與的反應(yīng)有:溶細胞活性，平滑肌的收縮，肥大細胞和血小板組胺的釋放，增強吞噬作用，淋巴細胞、巨噬細胞的趨化和激活。我需要滅活血清嗎？–實驗顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清，對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或*沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形...
查看更多2022-413
細胞培養(yǎng)為什么要加入胎牛血清許多臨床和做科研的小伙伴們都要涉及到細胞培養(yǎng)，在細胞培養(yǎng)實驗中，血清無疑成為影響實驗成功與否的重要因素，而在眾多血清之中，牛血清是最為常用的。牛血清是細胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基，其中含有豐富的細胞生長所必須的營養(yǎng)成份，常用于動物細胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。牛血清是一種成分復(fù)雜的混合物，而且血清的組成及含量通常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而存在差異。牛血清主要成分有蛋白質(zhì)，多肽類，激素類，其他成分如氨基酸、葡萄糖、微量元...
查看更多2022-413
關(guān)于胎牛血清熱滅活的問題成為常規(guī)操作的血清熱滅活至少70%的研究者對血清的滅活僅僅是因為遵照常規(guī)操作，或者說認(rèn)為是理所當(dāng)然的。常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間，而時間則從15分鐘到60分鐘不等，其中常用的手法是56℃熱處理30分鐘。隨著血清采集、處理、加工工藝的提高，許多早先認(rèn)為是熱滅活的原因已經(jīng)不再成立，只有少數(shù)對血清進行熱滅活的研究者在實驗中證實了這一步驟的有效性和必要性。熱敏補體與熱滅活熱滅活目的是為了去除血清中補體等對熱敏感的物質(zhì)，但是在胎牛血清中對補體的滅活則...
查看更多2022-411
教你一眼判斷血清的質(zhì)量淡黃色，透明——2小時以內(nèi)的國產(chǎn)新生牛血清，膽紅素含量較少；金黃色，透明——產(chǎn)下較長時間的新生牛血清，一般超過2小時了；金黃色，不透明——產(chǎn)下幾天或更久的小牛血清；淡黃色，帶一點微紅，透明——等級最高的進口胎牛血清，如特級的北美；淡紅色，透明——普通的進口胎牛血清；紅色偏深，透明——普通的進口胎牛血清，南美的居多，采血環(huán)節(jié)不夠嚴(yán)謹(jǐn)；紅色偏暗，透明——普通胎牛血清，保存不好，血紅蛋白氧化了；紅色，不透明——進口小牛血清，透明度越差，牛齡越大。
查看更多2022-48
03細胞凍存：試劑：凍存液，PBS，胰酶，含血清的培養(yǎng)基；流程：要凍存，先配置凍存液，凍存液包含了：DMSO：防止在低溫（零度以下至-196℃）保存細胞時，細胞內(nèi)液會形成冰晶，滲透壓會發(fā)生改變，細胞結(jié)構(gòu)會出現(xiàn)紊亂，會導(dǎo)致細胞出現(xiàn)損傷。凍存液制備時，一般需與血清一起配置：因為兩者互融時，會散發(fā)熱量，所以凍存液需提前制備。因為細胞太多了，需要凍存，所以要先看一看，吸一吸，洗一洗，分一分，中和一下，吹打制成細胞懸液，離心，吸掉上清液，加入凍存液，輕輕吹吸均勻，每管等量1ml裝入凍存...
查看更多2022-47
PAN胎牛血清的解凍正確方法胎牛血清的正確存放與解凍是各位實驗家尤為關(guān)注的一個問題，在保證質(zhì)量的前提下，胎牛血清的正確存放與解凍的方法總結(jié)如下：1）胎牛血清從冷凍箱取出后，先置于2-8℃的冰箱使之全融。但必須注意的是，溶解過程中必須規(guī)則的搖晃均勻；2）長時間儲存在2-8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此，推薦在-20℃以下存儲血清，避免反復(fù)凍融。3）建議血清硬保存在-20℃條件下。若存放于4℃時，請勿超過1個月。若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝...
查看更多2022-46
如何避免細胞培養(yǎng)過程中的污染?主要還是考慮無菌環(huán)境，盡量做好操作臺的滅菌，別把培養(yǎng)基滴落在生物安全柜的入風(fēng)口，別在培養(yǎng)箱里把培養(yǎng)基打翻。這兩個地方霉菌一旦滋生，那你就只能等著用甲醛熏蒸了。紫外無法殺滅霉菌，酒精也不行，只能用甲醛熏蒸，但是一定要注意安全。復(fù)蘇的時候，水浴鍋也需要進行滅菌處理。一旦出現(xiàn)污染，不要急，能救的就用抗生素救一下，但是一般情況下，選擇扔掉。避免交叉感染，要不只能整個實驗室消毒了。如果細胞發(fā)生微生物污染時，應(yīng)如何處理？原則上：直接滅菌后丟棄之。當(dāng)重要的培養(yǎng)...
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